Антинуклеарный фактор (АНФ, HEp-2, титры. Антинуклеарные антитела методом непрямой иммунофлюоресценции на препаратах HEp-2-клеток; ANA IF, titers) в Бугуруслане

Правила подготовки к исследованию крови на Антинуклеарный фактор

В каких случаях проводят анализ крови на Антинуклеарный фактор:

• системная красная волчанка (СКВ);
• подострая кожная волчанка и другие разновидности кожной волчанки;
• смешанное заболевание соединительной ткани;
• синдром Шёгрена и ассоциированные заболевания;
• диффузная и локализованная склеродермия, CREST-синдром;
• воспалительные миопатии (полимиозит и дерматомиозит);
• ювенильный хронический артрит;
• аутоиммунный гепатит;
• первичный билиарный цирроз и склерозирующий холангит;
• полинейропатии и миелит.

Единицы измерения: титр.

Референсные значения: < 1:160.

Иногда могут быть описаны два типа свечения, при котором один в низких титрах маскирует другой. При выявлении положительного результата АНФ необходимо постараться установить антигенные мишени антинуклеарных антител с помощью тестов выявления антител к двуспиральной ДНК (№ 126) и антител к нуклеосомам (№ 956), иммуноблота антинуклеарных антител (№ 827), иммуноблота антител при склеродермии (№ 826), иммуноблота антител при полимиозите (№ 939) и определения антител к кардиолипину (№№ 967, 968, 969, 997).

Интерпретация результатов исследования на Антинуклеарный фактор

Результатом определения антинуклеарного фактора является титр – значение конечного разведения сыворотки, при котором сохраняется значимая флуоресценция ядра. Чем выше знаменатель дроби, тем больше разведение сыворотки, тем больше антител в сыворотке больного. Высокий титр разведения сыворотки отражает высокую аффинность и концентрацию аутоантител.

Выявление высокого титра (1/640 и выше) указывает на высокую вероятность системного ревматического заболевания или аутоиммунного заболевания печени и требует внимательного клинического, лабораторного и инструментального обследования. Отсутствие повышенного титра антинуклеарного фактора значительно снижает вероятность системных аутоиммунных заболеваний.

В низком титре (до 1/160) антинуклеарный фактор может отмечаться у 1-2% здоровых людей и родственников больных с системными заболеваниями. Частота положительного титра в популяции несколько увеличивается с возрастом. Низкий титр антинуклеарных антител может встречаться при многих аутоиммунных, инфекционных и онкологических заболеваниях. Отсутствие высокого титра антинуклеарных антител значительно снижает вероятность системного ревматического процесса и может использоваться скорее для исключения, чем подтверждения диагноза.

Повышение титра АНФ в динамике указывает на обострение системного заболевания, так при СКВ титр коррелирует с тяжестью процесса и снижается при эффективной терапии.

Кроме титра сыворотки, при положительном результате анализа описывается тип свечения ядра. Описано более двадцати типов свечения, однако в клинической практике используются восемь из них (см. таблицу).

A12.06.057.000.03 (Номенклатура МЗ РФ, Приказ №804н)

Синонимы: Анализ кров на антинуклеарные антитела; Антиядерные антитела; АНА нРИФ; Antinuclear Antibodies; ANA indirect immunofluorescence assay IFA, HEp-2 Substrate; ANA-HEp2; Fluorescent AntiNuclear Antibody detection; FANA.

Краткое описание исследования «Антинуклеарный фактор»

Что такое антинуклеарный фактор?

Антинуклеарный фактор (АНФ) - это традиционное обозначение результатов исследования антинуклеарных антител (АНА), полученных при использовании метода непрямой реакции иммунофлуоресценции на клеточных и тканевых субстратах (преимущественно на препаратах клеток HEp-2).

Антинуклеарные антитела (АНА) – это семейство аутоантител, направленных против внутриклеточных антигенов собственных клеток организма. Исторически антитела этой группы, направленные против ядер клеток, были впервые выявлены в сыворотке больных системной красной волчанкой (СКВ), из их точных мишеней были известны только двухспиральная ДНК и гистоны, поэтому они получили общее название «антинуклеарные антитела».

В настоящее время описано около двухсот разновидностей антител к нуклеопротеинам и рибонуклеиновым кислотам. При аутоиммунных заболеваниях аутоантитела к ядерным антигенам не обладают прямым цитотоксическим действием на клетки человека, однако иммунные комплексы способны запускать иммунологическое воспаление, особенно в сосудах микроциркуляторного русла (в почках, коже, центральной нервной системе, синовиальной оболочке суставов, плевре).

Роль АНА в диагностике некоторых аутоиммунных заболеваний

АНА - ценный лабораторный маркер разных аутоиммунных заболеваний. Специфические антинуклеарные антитела включены в классификационные критерии ряда аутоиммунных заболеваний.

При системной красной волчанке и других системных ревматических заболеваниях иммунный ответ направлен против нуклеопротеиновых антигенов, т. е. комплексов нуклеиновых кислот и белков. В развитии таких патологических аутоиммунных реакций имеют значение, в частности:

• генетическая предрасположенность;
• эпигенетические факторы (внешние и внутренние воздействия - питание, стресс, экология, образ жизни);
• молекулярная мимикрия (структуры различных микробных, вирусных белков/метаболитов похожи на те, которые экспрессируются в организме человека, что может провоцировать аутоиммунные реакции).

Особенности теста АНФ (Антинуклеарные антитела методом непрямой иммунофлуоресценции на препаратах HEp-2-клеток)

Метод непрямой иммунофлуоресценции на препаратах HEp-2-клеток с указанием типа свечения и титра выявленных антител – это «золотой стандарт» исследования антинуклеарных антител и рекомендуемый скрининговый тест при подозрении на системные аутоиммунные ревматические заболевания. Ядро и цитоплазма клеток НЕр-2 содержат все антигены, характерные для человеческой клетки, что позволяет выявлять в одном тесте основные виды антинуклеарных антител. Часть их имеет мишенью ДНК или связанные нуклеосомные белки, другие нацелены на РНК и рибонуклеопротеины, антигены ядерной оболочки или аппарата митотического веретена. Многие из рибонуклеопротеиновых мишеней могут находиться как в ядре клетки, так и в цитоплазме, некоторые исключительно в цитоплазме, т. е. являются не нуклеарными, а цитоплазматическими антигенами. Однако все эти антитела причисляют к антинуклеарным соответственно обозначению метода их исследования, при этом выявляемый данным методом спектр антител шире и объединяет антитела не только к ядерным, но и другим внутриклеточным аутоантигенам. При положительном результате АНФ указывается титр сыворотки и тип выявленного свечения. Типы свечения, возможные мишени соответствующих антител и связанные заболевания – см. раздел Интерпретация.

Вероятная клиническая значимость выявленного типа свечения и титр антител учитывается в комплексе с клинической картиной, что позволяет планировать дальнейшее тестирование для уточнения специфичности антинуклеарных антител.

Альтернативные методы выявления АНА

В силу многообразия антигенов антинуклеарных антител не все они могут быть очищены или синтезированы для использования в автоматизированных иммуноферментных тестах по выявлению антинуклеарных антител. В свою очередь легкорастворимые компоненты ядра клетки могут утрачиваться из ядер клеток при фиксации препарата для проведения исследований антинуклеарного фактора методом непрямой иммунофлуоресценции. Поэтому использование ИФА методов (см. тесты № 825, № 125) в комплексе с выявлением антинуклеарного фактора на клетках линии НЕр-2 методом непрямой иммунофлуоресценции позволяет избежать ложноотрицательных результатов тестирования при скрининге системных ревматических заболеваниях.

При каких заболеваниях обнаруживают в крови антинуклеарный фактор

Позитивность по антинуклеарному фактору на клеточной линии НЕр-2 отмечается при системной красной волчанке, системных ревматических и многих других аутоиммунных заболеваниях, что делает его универсальным скрининговым тестом в обследовании больных с подозрением на системную аутоиммунную патологию.

Положительный результат АНФ отмечается более чем у 90% больных с диффузными болезнями соединительной ткани, такими как:

• СКВ и кожные формы этого заболевания;
• склеродермия и ее разновидности;
• смешанное заболевание соединительной ткани;
• синдром Шёгрена.

Выявление антинуклеарного фактора имеет большое значение в диагностике ювенильного ревматоидного артрита.

Данные аутоантитела могут быть обнаружены:

• при аутоиммунных (тиреоидит, диабет, аутоиммунные заболевания печени);
• при инфекционных (вирусный гепатит) заболеваниях;
• при воспалительных заболеваниях;
• при онкологических заболеваниях.

Встречаемость антинуклеарного фактора достигает 1-3% у клинически здоровых людей и несколько возрастает у людей старше 65 лет.

С какой целью определяют антинуклеарный фактор

Метод непрямой иммунофлуоресценции на клеточной линии НЕр-2 рекомендован в качестве «золотого стандарта» выявления антинуклеарных антител и используется в качестве основного теста для начального тестирования в диагностике системных ревматических заболеваний.

Литература

1. Клинические рекомендации. Другие гепатиты. МЗ РФ. – 2025.
2. Клинические рекомендации. Неспецифический аортоартериит (дети). МЗ РФ. – 2025.
3. Клинические рекомендации. Системная красная волчанка (взрослые). МЗ РФ. – 2025.
4. Клинические рекомендации. Системная красная волчанка (дети). МЗ РФ. – 2024.
5. Клинические рекомендации. Системный склероз (дети). МЗ РФ. – 2025.
6. Российские клинические рекомендации. Ревматология / Е. Л. Насонов. – Москва : ГЭОТАР-Медиа, 2017. – 464 с.
7. Andrade L. E. C. et al. Antinuclear antibodies (ANA) as a criterion for classification and diagnosis of systemic autoimmune diseases //Journal of translational autoimmunity. – 2022. – Т. 5. – С. 100145.
8. Fritzler M. J., Choi M. Y. Antinuclear antibody testing: Gold standard revisited //The Journal of Applied Laboratory Medicine. – 2022. – Т. 7. – №. 1. – С. 357-361.
9. von Mühlen C. A. et al. How to report the antinuclear antibodies (anti-cell antibodies) test on HEp-2 cells: guidelines from the ICAP initiative //Immunologic Research. – 2021. – Т. 69. – №. – С. 594-608.
10. Материалы фирмы-производителя реагентов.