Антитела класса IgG к Borrelia burgdorferi (sensu lato), исследование методом Вестерн-блот (anti-Borrelia IgG, Western blot)

Синонимы: Анализ крови на возбудителя боррелиоза; Антитела IgG к боррелиям.

Serum for borreliosis pathogen; IgG antibodies to Borrelia burgdorferi.

Краткое описание исследования «Антитела класса IgG к Borrelia burgdorferi (sensu lato), исследование методом Вестерн-блота»

Исследование IgG антител к боррелиям методом Вестерн-блота позволяет дать раздельный ответ по наличию IgG антител к девяти различным специфичным антигенам боррелий, что в сомнительных случаях служит полезным дополнением к ИФА-методу определения антител класса G (см. тест № 243), служащих маркером текущей или прошлой инфекции.

Боррелиоз (болезнь Лайма)

Бактерии, относящиеся к совокупности видов Borrelia burgdorferi sensu lato, являются возбудителями болезни Лайма (бореллиоза) у человека. Это заболевание относится к числу наиболее распространенных в России природно-очаговых инфекций с трансмиссивным путем передачи. Известно более десяти видов Borrelia burgdorferi sensu lato, в том числе девять, строго связанных с Евразией (B. afzelii, B. garinii, B. japonica, B. lusitaniae, B. spielmanii, B. sinica, B. tanukii, B. turdi и B. valaisiana), три вида ассоциируется только с США (B. andersonii, B. californiensis и B. carolinensis).

Возбудитель Borrelia burgdorferi попадает в организм человека с укусом инфицированного клеща. Инкубационный период заболевания после инфицирования составляет 1-2 недели. В течение болезни Лайма выделяют стадии ранней (локальной и диссеминированной) и поздней инфекции. В месте проникновения возбудителя появляется мигрирующая эритема (иногда это единственное проявление ранней стадии), которая держится около месяца. Классические формы болезни Лайма, как правило, легко выявляются симптоматически. У 20-45% больных возможна безэритемная форма заболевания. Далее у 10-15% пациентов при диссеминации развиваются признаки поражения:

• нервной системы (менингит, менингополирадикулоневрит, периферический паралич лицевого нерва);
• сердечно-сосудистой системы;
• опорно-двигательного аппарата (у 60% пациентов).

Поздняя стадия формируется на протяжении первых двух лет от начала заболевания, клинически характеризуется общей слабостью, поражением суставов и нервной системы. Патогномоничным поражением кожи является хронический атрофический акродерматит.

Клинические и лабораторные особенности, выявленные у больных с признаками персистенции боррелиозной инфекции (например, обнаружение ревматоидного фактора в крови), свидетельствуют о возможности аутоиммунных процессов, развивающихся в результате молекулярной мимикрии между эпитопами антигенов боррелии и тканями хозяина и обусловливающих варианты болезни Лайма, резистентные к лечению антибиотиками.

Лабораторная диагностика болезни Лайма основывается на серологических (ИФА, иммуноблот) и молекулярно-генетических (ПЦР) методах анализа. Прямые лабораторные методы обнаружения B. burgdorferi, к которым относится метод ПЦР обнаружения ДНК возбудителя, не нашли широкого применения на практике в связи с низким содержанием боррелий в клинических образцах человека и соответственно недостаточной диагностической значимостью, в настоящее время они не рекомендованы для диагностики болезни Лайма. Совершенствование серологического метода (выявления в сыворотке крови антител к возбудителю) для диагностики боррелиоза позволило в последнее время в большинстве стран мира перейти от принципа трехшагового лабораторного подтверждения диагноза на двухшаговый – ИФА, иммуноблоттинг.

Исследование антител как непрямой метод диагностики инфекции имеет определенные ограничения. Отрицательный результат серологических тестов на ранних стадиях инфекции не является подтверждением ее отсутствия и требует перепроверки в динамике через 2-4 недели. Обнаружение антител класса IgM и дальнейшее появление IgG антител является диагностическим критерием течения боррелиоза. На диссеминированной и хронической стадиях специфические антитела к возбудителю класса IgG присутствуют практически всегда. Антитела класса IgG циркулируют в крови длительный срок (от нескольких месяцев до нескольких лет) даже после успешной антимикробной терапии и излечения болезни. Поэтому по присутствию и титру антител об успехе лечения судить нельзя. Иммунитет к Borrelia burgdorferi носит нестерильный характер. У переболевших людей возможно повторное заражение через несколько лет.

Выявление антител к Borrelia burgdorferi не всегда сопровождается клиническими признаками болезни Лайма. Поэтому, согласно принципу двухшагового лабораторного подтверждения данного диагноза, положительные результаты, полученные методом ИФА, обязательно должны подтверждаться другим методом.

С какой целью выполняют исследование

Тест используют для диагностики клещевого боррелиоза (болезни Лайма) и ассоциированных с ним заболеваний.

Что следует учесть при проведении исследования

Для исключения ложноположительных результатов ИФА, подтверждения диагноза, дифференцированной диагностики, мониторинга заболевания рекомендуется использовать метод иммуноблота, который позволяет раздельно определять IgM и IgG к отдельным белкам боррелии. Для быстрой интерпретации дифференциально-диагностическое значение имеет выявление IgM: OspC и IgG: VlsE (Variable major protein-like sequence, Expressed). Для референс-исследований наряду с этими белками имеет значение определение и других специфических антигенов.

Состав используемых для выявления антител к Borrelia специфических антигенов

Источником антигенов для тестов Anti-Borrelia EUROLINE-WB является специально подобранный штамм Borrelia afzelii. Тестовый набор содержит тестовые стрипы с электрофоретически разделенными экстрактами, содержащими антигены Borrelia afzelii и мембранный чип с рекомбинантным антигеном VlsE (экспрессированная основная вариабельная белковоподобная последовательность).

Литература

1. Белов Б. С., Ананьева Л. П. Болезнь Лайма: современные подходы к профилактике, диагностике и лечению (по материалам международных рекомендаций 2020 г.) //Научно-практическая ревматология. – 2021. – Т. 59. – №. 5. – С. 547-554.
2. Богданова Т. В., Рюмин А. М., Соболевская О. Л. Диагностика хронического Лайм-боррелиоза, протекающего с поражением нервной системы //Журнал инфектологии. – 2024. – Т. 16. – №. 3. – С. 17-23.
3. Самойлов К. В. и др. Особенности иммунного ответа в ранний период иксодовых клещевых боррелиозов //Эпидемиология и инфекционные болезни. – 2023. – Т. 28. – №. 5. – С. 319-330.
4. Grąźlewska W., Holec-Gąsior L. Antibody cross-reactivity in serodiagnosis of lyme disease //Antibodies. – 2023. – Т. 12. – №. 4. – С. 63.
5. Lantos P. M. et al. Clinical practice guidelines by the Infectious Diseases Society of America, American Academy of Neurology, and American College of Rheumatology: 2020 guidelines for the prevention, diagnosis, and treatment of Lyme disease //Neurology. – 2021. – Т. 96. – №. 6. – С. 262-273.
6. Markowicz M. et al. Persistent anti-Borrelia IgM antibodies without Lyme borreliosis in the clinical and immunological context //Microbiology Spectrum. – 2021. – Т. 9. – №. 3. – С. e01020-21.
7. Sloupenska K. et al. Antigenicity and immunogenicity of different morphological forms of Borrelia burgdorferi sensu lato spirochetes //Scientific Reports. – 2024. – Т. 14. – №. 1. – С. 4014.

Правила подготовки к исследованию

Специальной подготовки не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее, чем через 4 часа после последнего приема пищи.

В каких случаях проводят анализ «Антитела класса IgG к Borrelia burgdorferi (sensu lato), исследование методом Вестерн-блота»:

• в дополнение и подтверждение результатов ИФА методов серологической диагностики боррелиоза (см. тесты №№ 243, 244);
• при подозрении на иксодовый клещевой боррелиоз (болезнь Лайма);
• ассоциированные патологические состояния: хроническая мигрирующая эритема, доброкачественный кожный лимфаденоз, атрофический хронический акродерматит, артрит, кардит, нейроборрелиоз.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения: нет.

Референсные значения: отрицательно.

Формат представления результата

Качественный (описание наличия/отсутствия полос, характеризующих выявление антител к каждому из указанных антигенов, в форме «положительно», «слабоположительно» или «отрицательно»; общее заключение о результате исследования в форме «положительный»/«отрицательный»).

При общей оценке результата учитывают положение окрашенных полос (специфичность антигена) и интенсивность их окрашивания (поскольку иногда возможна неспецифическая слабая ложная реакция с отдельными антигенами).

Трактовка результатов исследования «Антитела класса IgG к Borrelia burgdorferi (sensu lato), исследование методом Вестерн-блота»

Отрицательно

Отсутствуют полосы специфических антигенов; наличие одной слабой или четкой полосы специфического антигена: р83, p39, p31, p30, OspC (p25), p21, p19, p17; наличие слабой полосы специфичного антигена VlsЕ.

Положительно

Положительная полоса антигена VlsE; наличие полосы VlsE слабой интенсивности и четкой полосы другого специфического антигена; наличие двух и более полос специфических антигенов.

Дополнительную информацию по клинической значимости и интерпретации результатов исследования «Антитела класса IgG к Borrelia burgdorferi, выявляемые методом иммуноблоттинга (anti-Borrelia burgdorferi IgG, Immunoblot)» см. в тесте № 243.