Боррелии, антитела класса IgM методом Вестерн-блота (anti-Borrelia IgM, Western blot)

Развернутое исследование антител класса IgM к антигенам боррелий методом Вестерн-блота. Диагностика ранних стадий Лайм борреллиоза основана преимущественно на характерных клинических признаках (мигрирующая эритема). Но у 20-45% больных возможна безэритемная форма заболевания. Диагностика в таких ситуациях по клиническим признакам практически невозможна. Серологические методы исследования часто помогают поставить правильный диагноз, хотя информативность серологического тестирования боррелиоза, к сожалению, ограничена. Определение антител класса IgM методом ИФА при серологической диагностике боррелиозной инфекции часто дает неясные результаты. У части пациентов отмечают длительное персистирование IgM антител, которые таким образом не всегда отражают свежую инфекцию. На поздней стадии боррелиоза положительный результат исследования IgM не дает никакой дополнительной информации. Распространенность антител к боррелиям в нормальной популяции зависит от региона и у людей, работающих в лесной зоне, может составлять до 40%. Антитела класса IgM иногда могут быть обнаружены спустя годы после возникновения инфекции или после лечения антибиотиками. Причина ложноположительных результатов часто остается невыясненной. В то же время, отрицательный результат по IgM не исключает наличия свежей инфекции, у части пациентов с текущей инфекцией отмечают серонегативность (отрицательный результат при исследовании специфических IgM и/или IgG). Нередки случаи расхождения результатов тестирования антител к Borrelia burgdorferi тест-системами разных производителей, что зависит от специфичности используемых антигенов и чувствительности систем. Таким образом, в диагностике боррелиоза часто возникает потребность в дополнительном серологическом исследовании, которое может дать более подробную информацию при неясной клинической картине или вызывающих сомнение результатах исследования IgM и IgG методом ИФА. Исследование IgM антител к боррелиям методом Вестерн-блота позволяет дать развернутый ответ по наличию антител к 10 различным антигенам боррелий, включая специфичный антиген OspC p25, являющийся маркером свежей инфекции. Обнаружение IgM антител против различных специфичных антигенов боррелий, при отсутствии антител к OspC, не считается достаточным указанием на недавно возникшую инфекцию. Для установления диагноза свежей боррелиозной инфекции полученный положительный результат по IgM-антителам следует подтвердить через 3-6 недель положительным результатом по антителам класса IgG на свежевзятом образце крови. Источник антигенов в данном тесте – белки из экстракта специально подобранного штамма Borrelia afzelii и рекомбинантный антиген VisE. Специфичность антигенов:

VisE	Экспрессированная основная вариабельная белково-подобная последовательность	Специфичен
83 кДа	Белок мембранных везикул р83	Специфичен
39 кДа	BmpA, p 39	Специфичен
31 кДа	OspA, p 31	Специфичен
30 кДа	p 30	Специфичен
25 кДа	OspC, p 25, маркер свежей инфекции	Специфичен
21 кДа	p 21	Специфичен
19 кДа	p 19	Специфичен
17 кДа	p 17	Специфичен

Распространенность положительного результата исследования антител класса IgM к боррелиям методом Вестерн-блота у клинически охарактеризованных пациентов c боррелиозом и здоровых доноров крови:

Образцы	Распространенность IgM
Эритема мигрирующая (n=47)	70%
Нейроборрелиоз (n=27)	48%
Артрит (n=33)	15%
Акродерматит (n=8)	13%
Здоровые доноры крови (n=80)	3%

1. Долгих Т. И. Современные возможности лабораторной диагностики инфекционных заболеваний (методы, алгоритмы, интерпретация рзультатов). Омск: 2005. – 40 с.
2. Информационно-методическое письмо «Профилактика и диагностика клещевых боррелиозов» № 17-22/65 17 мая 2005 г. Территориальное управление федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по городу Москве».
3. Clinical relevance of different IgG and IgM antibody responses to Borrelia bugdorferi after antibiotic therapy for erythema migrans. Long-term follow-up study of 113 patients. – Arch.dermatol. 2006, vol. 142, p. 862-868.
4. Nau R.. Christen H-J., Eiffert H. Lyme Disease—Current State of Knowledge. - Dtsch Arztebl Int. 2009; 106(5): 72–82
5. Материалы фирмы- производителя реагентов (Euroimmun).

В дополнение и подтверждение результатов ИФА методов серологической диагностики боррелиоза (см. тесты №№ 243, 244 - антитела к боррелиям IgM, IgG), при подозрении на иксодовый клещевой боррелиоз, болезнь Лайма. Ассоциированные патологические состояния: хроническая мигрирующая эритема, доброкачественный кожный лимфаденоз, атрофический хронический акродерматит, артрит, кардит, нейроборрелиоз.

Формат выдачи результата: качественный (описание наличия/отсутствия полос, характеризующих выявление антител к каждому из указанных антигенов в форме «положительно» или «отрицательно»; общее заключение о результате исследования в форме: «положительный»/«отрицательный»/«неопределенный»).

Референсные значения: отрицательный. 

Интерпретация результатов 

Положительный. Антитела класса IgM обнаружены. Обнаружение IgM антител против различных специфичных антигенов боррелий, при отсутствии антител к OspC, не считается достаточным указанием на недавно возникшую инфекцию. Для установления диагноза свежей боррелиозной инфекции полученный положительный результат по IgM-антителам следует подтвердить через 3-6 недель положительным результатом по антителам класса IgG на свежевзятом образце крови.

 

Отрицательный. Антитела класса IgM не обнаружены. Отрицательный результат по IgM не исключает полностью вероятности наличия свежей инфекции. При имеющихся клинических подозрениях на клещевой боррелиоз, целесообразно повторить исследование на специфические IgM и IgG антитела через 3-4 недели. 

Неопределенный. По полученным результатам исследования (слабая полоса антигена OspC, отсутствие других положительных полос по специфичным антигенам) нельзя дать определенное заключение о наличии IgM антител к боррелиям. При имеющихся клинических подозрениях на клещевой боррелиоз целесообразно повторить исследование через 3-4 недели.