Тест активации базофилов (Basophil activation test)

Синонимы: Тест активации базофилов с использованием проточной цитометрии.

Basophil activation test (BAT), flow cytometry.

Доступные для исследования аллергены:

Анестетики:

№ 4204 Индекс стимуляции базофилов, С82 Лидокаин (Basophil stimulation index, C82 Lidocaine)

№ 4205 Индекс стимуляции базофилов, C68 Артикаин (Basophil stimulation index, C68 Articaine)

№ 4206 Индекс стимуляции базофилов, С88 Мепивакаин (Basophil stimulation index, C88 Mepivacaine)

№ 4207 Индекс стимуляции базофилов, С89 Бупивакаин/Маркаин (Basophil stimulation index, C89 Bupivacaine/Marcaine)

Нестероидные противовоспалительные средства (НПВС):

№ 4208 Индекс стимуляции базофилов, С51 Аспирин (Basophil stimulation index, C51 Aspirin)

№ 4209 Индекс стимуляции базофилов, С20 Парацетамол/Ацетаминофен (Basophil stimulation index, C20 Paracetamol/Acetaminophen)

№ 4210 Индекс стимуляции базофилов, С91 Анальгин/Метамизол (Basophil stimulation index, C91 Analgin/Metamizole)

№ 4211 Индекс стимуляции базофилов, С281 Диклофенак (Basophil stimulation index, C281 Diclofenac)

№ 4212 Индекс стимуляции базофилов, С286 Ибупрофен (Basophil stimulation index, C286 Ibuprofen)

Краткое описание исследования «Тест активации базофилов»

Тест активации базофилов – исследование с применением метода проточной цитометрии, в котором оценивают изменение экспрессии маркеров активации на поверхности базофилов крови после их стимуляции определенным аллергеном, находит применение в целях обследования пациентов с подозрением на IgE-опосредованную аллергологическую патологию.

Базофилы, наряду с тучными клетками, участвуют в формировании реакции гиперчувствительности первого (немедленного) типа, IgE-зависимой аллергической реакции, они сенсибилизированы тем же набором IgE, что и тучные клетки, которые находятся в тканях и не выходят в кровоток. Поэтому тест активации базофилов считается истинным отражением сенсибилизации тучных клеток.

В отличие от тучных клеток базофилы локализуются в кровеносном русле, что позволяет использовать пробы крови для выявления аллерген-специфической сенсибилизации. Базофилы экспрессируют на своей поверхности высокоаффинный IgE-рецептор (FcεRI). Попарное связывание двух локализованных рядом молекул специфических IgE на поверхности базофилов и тучных клеток с двумя эпитопами молекулы аллергена вызывает активацию клетки. Активированные клетки высвобождают содержимое своих гранул и поддерживают течение аллергического процесса. Дегрануляции базофилов предшествует повышение экспрессии на их поверхности специфических клеточных маркеров (маркеры активации), одним из которых является рецептор CD203c. Оценка уровня экспрессии CD203c у пациентов с клиническими признаками сенсибилизации позволяет выявить причинно-значимый аллерген в случае IgE-зависимого иммунного ответа.

Поскольку тест активации базофилов – функциональный тест с использованием стимуляции аллергеном живых клеток в свежей пробе цельной крови, выявляющий перекрестное связывание IgE, его результат в части ситуаций может представлять более точную оценку сенсибилизации, чем измерение концентрации аллерген-специфичных IgE. Сравнительно с провокационными пробами он менее инвазивный и более комфортный для пациента: в нем исключено воздействие исследуемого аллергена на пациента, поскольку тест активации базофилов является лабораторным, который проводится с использованием пробы крови пациента в условиях in vitro. Таким образом, тест активации базофилов сочетает в себе, в определенной степени, преимущества провокационных проб и безопасность пробирочных тестов.

Ограничения метода

Аллергия, особенно к лекарственным препаратам, не всегда протекает по IgE-зависимому механизму. Клиническая чувствительность и специфичность теста активации базофилов значительно варьирует в зависимости от исследуемого препарата, что прямо связано с механизмами реакции. Хотя тест активации базофилов предоставляет дополнительную информацию в идентификации пациентов группы риска реакций гиперчувствительности немедленного типа, текущая недостаточная стандартизация и строгие требования по преаналитическим условиям (необходимость использования свежих проб) ограничивают его клиническое использование.

Пациенты с подтвержденным диагнозом базопении не подлежат тестированию данным методом. Проведение теста в период обострения аллергического заболевания может нести риск получения ложноотрицательного результата, т. к. у некоторых пациентов наблюдается высокий уровень спонтанной активации базофилов. Интерпретация отрицательного результата у пациента, относящегося к группе рефрактерных индивидов (не отвечающих на IgE-опосредованную активацию базофилов, это 5-10% индивидов), имеющего незначительный уровень активации в положительном контроле, может носить неоднозначный характер. Для таких пациентов данный вид исследования не может применяться как диагностический.

С какой целью выполняют исследование

Данное исследование может быть использовано в качестве вспомогательного в диагностике гиперчувствительности I типа к исследуемым аллергенам (пищевым, лекарственным, ядам перепончатокрылых) в числе дополнительных тестов, если результаты рутинных клинических (кожные пробы) или лабораторных аллерготестов (оценка уровня специфических IgE в сыворотке крови) сомнительны, или расходятся с анамнезом, несут повышенные риски для пациента, или для их выполнения нет доступных реагентов.

Литература

1. Бычкова Н. В. Активация базофилов: теоретические аспекты и применение в диагностике аллергических заболеваний //Медицинская иммунология. – 2021. – Т. 23. – №. 3. – С. 469-482.
2. Козлова Я. И. и др. Тест активации базофилов в диагностике хронической крапивницы //Российский иммунологический журнал. – 2019. – Т. 13. – №. 4. – С. 1482-1484.
3. Романова И. В., Гончаров А. Е. Тест активации базофилов: технология метода и его применение в клинической практике //Иммунопатология, аллергология, инфектология. – 2018. – №. 1. – С. 26-34.
4. Broyles A. D. et al. Practical guidance for the evaluation and management of drug hypersensitivity: specific drugs //The Journal of Allergy and Clinical Immunology: In Practice. – 2020. – Т. 8. – №. 9. – С. S16-S116.
5. Jakubovic B. D. et al. Drug hypersensitivity in the fast lane: what clinicians should know about phenotypes, endotypes, and biomarkers //Annals of Allergy, Asthma & Immunology. – 2020. – Т. 124. – №. 6. – С. 566-572.
6. Mayorga C. et al. Flow‐based basophil activation test in immediate drug hypersensitivity. An EAACI task force position paper //Allergy. – 2024. – Т. 79. – №. 3. – С. 580-600.
7. Santos A. F., Alpan O., Hoffmann H. J. Basophil activation test: mechanisms and considerations for use in clinical trials and clinical practice //Allergy. – 2021. – Т. 76. – №. 8. – С. 2420-2432.
8. Материалы фирмы-производителя реагентов.

Правила подготовки к исследованию

Недопустимо использование проб пациентов, принимавших накануне сдачи крови лекарственные средства: глюкокортикостероиды системного назначения, азатиоприн, циклофосфамид, циклоспорин); цитостатики (ингибиторы тирозинкиназ) системного назначения (ибрутиниб); иммуностимулирующие средства (например, рекомбинантный IL-2); радио- или химиотерапевтические препараты (включая период после применения химиотерапии, составляющий менее 6 недель).

Проведение теста в период обострения аллергического заболевания, когда у некоторых пациентов наблюдается высокий уровень спонтанной активации базофилов, может нести риск получения ложноотрицательного результата.

В каких случаях проводят анализ «Тест активации базофилов»:

• в качестве вспомогательного исследования в ситуациях, когда результаты рутинных аллерготестов – клинических (кожные пробы) или лабораторных (оценка уровня специфических IgE в сыворотке крови) – сомнительны, или расходятся с анамнезом, или выполнение несет повышенные риски, или для них нет доступных реагентов.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения: относительные единицы.

Референсные значения: значение SI в пробах с аллергенами оценивают относительно порогового значения SI в паспорте аллергена, которое будет приведено на бланке результата.

Формат представления результата

Количественный.

Результатом проведения анализа является Индекс стимуляции (SI) для положительного контроля и проб с аллергенами.

Индекс стимуляции (SI) указывается без единиц измерения, отражает отношение интенсивности флюоресценции положительного контроля или пробы с аллергеном к интенсивности флюоресценции отрицательного контроля.

Трактовка результатов исследования «Тест активации базофилов»

При SI равном или превышающем указанное в паспорте аллергена пороговое значение, делают вывод о наличии у пациента сенсибилизации к данному аллергену, при меньших значениях SI – об отсутствии сенсибилизации.

Примечания:

В некоторых ситуациях результат не подлежат интерпретации (если индекс стимуляции в положительном контроле менее 1,1, то отрицательный результат в пробе с аллергеном можно расценивать только как ложноотрицательный). Подобный результат может быть получен в случае, если:

• пациент относится к группе так называемых рефрактерных индивидов, не отвечающих на IgE-опосредованную активацию базофилов (приблизительно 5 – 10 % индивидов). Для таких пациентов данный вид исследования не может быть применен как диагностический.
• у пациента в момент обследования наблюдается высокий уровень спонтанной активации базофилов (в отрицательном контроле). Рекомендуется произвести повторное взятие крови и анализ у данного пациента вне периода обострения, соблюдая технику взятия и транспортирования образца.

Следует учитывать, что аллергия, особенно к лекарственным препаратам, не всегда протекает по IgE-зависимому механизму. Клиническая чувствительность и специфичность теста значительно варьирует в зависимости от исследуемого препарата.

Рис. 1. Блок-схема интерпретации результата.