Метод определения
Гистологическое исследование биоптатов шейки матки согласно гистологической классификации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) с окрашиванием гематоксилином-эозином. ИГХ-исследование индекса пролиферативной активности с применением моноклональных антител к Ki-67 (MIB-1) и белку p16INK4a (пероксидазный и авидин-биотиновый методы).
Исследуемый материал
Биоптат опухоли, фиксированный в парафиновом блоке
Комплексное исследование биоптатов шейки матки, включающее морфологическое описание и гистохимическую оценку экспрессии p16
для уточнения биологического потенциала диспластических изменений в эпителии шейки матки.
Рак шейки матки
является превалирующим среди онкологических заболеваний у женщин и остается одной из важных медицинских и социальных проблем в экономически развитых странах. Ежегодная статистика первичной выявляемости рака шейки матки составляет 10-12 случаев на 100 тысяч женщин. От стадии и распространенности опухоли на момент выявления зависят возможности терапии и прогноз выживаемости.
Своевременное распознавание и корректное лечение предраковых процессов шейки матки имеют существенное значение в связи с локальным характером прединвазивной и микроинвазивной стадий рака шейки матки. Удаление опухоли в таких случаях приводит не только к полному выздоровлению больных в ряде случаев, но и к репродуктивной, психоэмоциональной и социальной реабилитации женщин. Проведение органосохраняющего лечения рака шейки матки является новым направлением в современной онкогинекологии.
В настоящее время доказано, что основным этиологическим фактором в индуцировании и развитии рака шейки матки является вирус папилломы человека (ВПЧ). Однократное выявление ВПЧ в эпителии шейки матки недостаточно информативно. Подавляющее большинство ВПЧ-инфекций являются скоротечными и существенно не влияют на механизмы роста эпителиальных клеток, организм способен избавиться от ВПЧ-инфекции в течение 6-12 месяцев. Однако небольшая доля инфицирования определенными типами ВПЧ может сохраняться и в отсутствие лечения приводить к малигнизации процесса. Патологический процесс протекает бессимптомно. В результате интеграции ВПЧ в геном эпителиальных клеток, в ядрах клеток происходит репликация вирусных онкобелков Е6 и Е7, которые могут вызвать неопластическую трансформацию с нарушением регуляции клеточного цикла.
Белок p16INK4a представляет собой ингибитор циклин-зависимых киназ и играет важную роль в регуляции клеточного цикла эукариот. Этот белок участвует в опосредованном через белок ретинобластомы (pRB) контроле перехода клетки из фазы G1 в фазу S, он подавляет опухолевый рост; повышенная экспрессия p16INK4a может запускать остановку цикла клеточного деления. Многие виды опухолей характеризуются инактивацией гена p16INK4a, что приводит к нарушению регуляции клеточного цикла и бесконтрольной пролиферации клеток. Но в опухолях, связанных с трансформирующим действием ВПЧ, отмечается увеличение экспрессии данного белка. Экспрессия белка p16INK4a реактивно увеличивается при росте количества вирусных онкобелков ВПЧ Е6 и Е7. При этом повышение экспрессии p16INK4a оказывается неэффективным для регуляции клеточного цикла, поскольку онкобелки ВПЧ действуют на уровне белка ретинобластомы. Повышение экспрессии p16INK4a применительно к этому виду опухолей рассматривают как косвенный признак интеграции ВПЧ высокого риска в геном и трансформации эпителиальных клеток под действием ВПЧ.
Антиген Кi-67, впервые описанный Gerdes и соав. в 1983 г., состоит из 2 полипептидных цепей с молекулярной массой 345 и 395 кДа. Это основная часть нуклеарного матрикса в интерфазе, ассоциирующаяся с хромосомами фазы митоза. Ki-67 является димерной молекулой, имеющей тесную связь с 10-й хромосомой, но конкретная роль этого протеина в процессе клеточного деления до сих пор неизвестна. Экспрессия Кi-67 позволяет выделить опухолевые клетки, находящиеся в активной фазе клеточного цикла на всем его протяжении (G1-, S-, G2- и M-фазы), кроме G0-периода.
Пролиферативная активность опухолевых клеток представляет собой «фракцию роста» новообразования и является ведущим фактором как в механизме злокачественной трансформации клеток, так и в биологическом поведении уже возникших опухолей. Пролиферативная активность опухоли − одна из наиболее важных характеристик ее фенотипа, в значительной степени определяющая скорость роста новообразования, способность его к метастазированию, к ответу на лечебные мероприятия и исход онкологического заболевания. Многие факторы, влияющие на течение и исход онкологических заболеваний, свое патогенетическое действие на опухоль опосредуют через изменение пролиферативной активности.
Гистологическая диагностика интраэпителиальной цервикальной неоплазии (CIN) исторически основывалась только на морфологической оценке метаплазированного эпителия и определении цитопатического воздействия ВПЧ. Рутинные гистологические методы не лишены субъективности оценки и иногда приводят к ложно-положительным или ложно-отрицательным диагнозам, что значительно сказывается на тактике прогноза и ведения пациентов. ИГХ-определение индекса пролиферации при исследовании экспрессии Ki-67 (MIB-1) является необходимым рутинным исследованием при любой онкопатологии. При дисплазиях умеренной и высокой степени (в 80–100% случаев CIN II и практически во всех случаях CIN III) и инвазивном раке шейки матки иммуногистохимически определяется усиленная экспрессия белка p16INK4a. ИГХ-определение экспрессии белка p16INK4a, в сопоставлении с индексом пролиферативной активности (экспрессия Ki-67), является одним из важных критериев для дифференциального диагноза дисплазии умеренной и высокой степени тяжести (CIN II и III) и начальных форм рака шейки матки (Аdenocarcinoma in situ, микроинвазивная аденокарцинома).
Пациентам
