Исследование TREC и KREC для диагностики иммунодефицитов (TREC and KREC analysis for immunodeficiency diagnostics)

Описание

Метод определения Полимеразная цепная реакция в реальном времени.

Исследуемый материал Смотрите в описании

Материал для исследования

Сухие пятна крови.

Синонимы: TREC и KREC в крови методом ПЦР; анализ TREC и KREC для диагностики первичных иммунодефицитных состояний; TREC/KREC для постнатальной диагностики первичных иммунодефицитных состояний.

TREC and KREC diagnostic; TREC and KREC assessment both in PID diagnosis; TREC/KREC analysis.

Краткое описание исследования TREC и KREC для диагностики иммунодефицитов

TREC и KREC являются кольцевыми ДНК-структурами и образуются как побочный продукт формирования специфических рецепторов T- и B-лимфоцитов. Благодаря их стабильной структуре и локализации внутри ядра их количество может быть измерено в периферической крови спустя длительное время после окончания дифференцировки клеток. Снижение уровня TREC и KREC является косвенным отражением лимфопении и нарушения созревания T- и/или B-лимфоцитов, сопровождающих целый ряд иммунодефицитных состояний.

TREC, или Т-рецепторное эксцизионное кольцо (T-cell receptor excision circle) формируется в тимусе в наивных Т-лимфоцитах в ходе VJ-рекомбинации TRA и TRD генов соответствующего рецептора. Образующиеся во время этого процесса кольцевидные фрагменты ДНК могут быть измерены методом количественной ПЦР. Концентрация TREC отражает общий пул наивных Т-лимфоцитов, недавно мигрировавших из вилочковой железы. Снижение уровня TREC ниже возрастных норм отражает как количественные изменения числа T-лимфоцитов, так и нарушение процессов их созревания и может наблюдаться при ряде иммунодефицитных состояний: тяжелые комбинированные иммунодефициты (ТКИН), 22q11 делеционный синдром (синдром Ди Джорджи), комбинированный иммунодефицит (КИН), атаксия-телеангиоэктазия (синдром Луи-Бар), синдром Вискотта-Олдрича, недостаточность DOCK8, гипогидротическая эктодермальная дисплазия с иммунодефицитом, трисомия 18 и 21 хромосомы, синдром Кабуки, CHARGE синдром, синдром Нунана, синдром Якобсена, синдром Ниймеген, синдром Фринса, синдром Шимке, метафизарная хондродисплазия Мак-Кьюсика, синдром CLOVES, синдром ЕЕС, дефект RAC2, синдром Ренпеннинга, TAR-синдром, а также состояния связанные с кольцевыми хромосомами 14, 17, а также микроделециями и микродупликациями хромосом 6p, 17p, 14q. Кроме этого, на концентрацию TREC могут влиять вторичные причины, такие как недоношенность ребенка, врожденные пороки сердца, хилоторакс, множественные аномалии развития, гастрошизис, неонатальная лейкемия, аутоиммунные заболевания у матери, ВИЧ-инфекция у матери, иммуносупрессия у матери.

KREC, или каппа-делеционное рекомбинационное эксцизионное кольцо (kappa-deleting recombination excision circle) образуется сходным образом в костном мозге в ходе рекомбинации IGK локуса легких цепей иммуноглобулинов B-лимфоцитов. Концентрация KREC отражает общий пул наивных недавно мигрировавших из костного мозга В-лимфоцитов. Уровень KREC снижен при нарушении дифференцировки B-клеточного звена иммунной системы и наблюдается при таких жизнеугрожающих состояниях как тяжелые комбинированные иммунодефициты (ТКИН), Х-сцепленной агаммаглобулинемии (болезнь Брутона) и XLA-подобных синдромах, синдроме Ниймеген. Кроме этого, на концентрацию KREC может влиять вторичные причины, такие как принятие различных медикаментов и иммуносупрессия у матери.

Причины изменения уровня TREC и KREC

В норме максимальные значения TREC и KREC наблюдаются у младенцев вскоре после рождения, затем их количество падает с течением жизни в связи с инволюцией тимуса и со снижением активности продукции наивных B-лимфоцитов в костном мозге. Однако снижение TREC и KREC ниже возрастных значений может быть проявлением приобретенных или стертых форм первичных и вторичных иммунодефицитов в любом возрасте. Часто причиной этого являются онкологические, гематологические, аутоиммунные заболевания, терапия иммуносупрессивными препаратами, инфицирование ВИЧ. Нередко снижение TREC и KREC обнаруживается у пациентов с вариабельными иммунодефицитами и у часто болеющих детей. Также восстановление количества TREC и KREC отражает эффективность репарации иммунной системы после перечисленных состояний, а также после перенесенной трансплантации костного мозга.

Подготовка

Что делать, если необходимо обследовать ребёнка на наследственные нарушения метаболизма?

По назначению врача или самостоятельно в любом медицинском офисе ИНВИТРО необходимо заранее приобрести набор для проведения исследования, в который входит:

Подготовка к исследованию и правила взятия крови у новорождённых

Взятие образцов крови у новорождённых детей осуществляется в родовспомогательных учреждениях специально подготовленным сотрудником, а в случае ранней выписки новорождённого (до 4 дня жизни) - специально подготовленной патронажной сестрой.
При обследовании новорождённых взятие пробы крови следует проводить не ранее 4-х суток у доношенных и 7-х суток у недоношенных детей. У новорождённых кровь берут из пяточки, у детей старше 3 мес – из пальца.
У новорождённых от начала полного грудного или искусственного вскармливания до взятия крови должно пройти не менее 4-х суток. Взятие крови проводят через 3 часа после кормления (у новорождённых - перед очередным кормлением).
Перед взятием крови у новорождённого стопу ребёнка необходимо тщательно вымыть мылом, протереть стерильным тампоном, смоченным 70% спиртом, а затем обработанное место промокнуть стерильной сухой салфеткой!
Прокол делают одноразовым стерильным скарификатором на глубину 2,0 мм (зоны прокола изображены на рисунке). Первую каплю крови удаляют стерильным сухим тампоном.
Мягким надавливанием на пятку способствуют накоплению второй капли крови, к которой перпендикулярно прикладывают специальную карточку из фильтровальной бумаги и пропитывают полностью и насквозь 5 зон, очерченных круговой линией. Пятна крови должны быть не меньше указанного на бланке размера, вид пятен должен быть одинаков с обеих сторон (рис. 3), (рис. 4). Никогда не используйте противоположную сторону фильтровальной бумаги для заполнения окружностей.
После взятия крови осушите зону прокола стерильным тампоном и наклейте бактерицидный пластырь на участок прокола. Внимание! От качества взятия крови зависит точность и достоверность исследования!
Специальную карточку из фильтровальной бумаги высушивают не менее 2 - 4 часов при комнатной температуре. Избегайте попадания прямых солнечных лучей! Для этого отведите внешний клапан карточки и подведите его край под противоположную поверхность фильтра (где не обозначены окружности), рис. 5. После полного высыхания капель крови переместите клапан карточки над поверхностью фильтра. Подпишите Фамилию И. О. ребёнка внизу карточки (Name) и укажите дату взятия крови (Date), рис. 6. Карточку поместите в маленький конверт и вложите его в предварительно подписанный большой конверт. Заполните направительный бланк заказа и также вложите его в большой конверт. 9. Передайте большой конверт в ближайший медицинский офис ИНВИТРО (конверт не запечатывается). Сотрудник ИНВИТРО в вашем присутствии проверит содержимое конверта и правильность заполнения бланка заказа. Хранение и транспортировка: до и после взятия крови набор хранить при комнатной температуре в сухом месте; избегать контакта с системами отопления; избегать попадания прямых солнечных лучей; при транспортировке упаковать набор (наборы) в полиэтиленовый герметично закрывающийся пакет.

Показания к назначению

В каких случаях проводят исследование TREC и KREC для диагностики иммунодефицитов:

неонатальный скрининг на первичные иммунодефициты (ПИД) и тяжелые комбинированные иммунодефициты (ТКИН);
диагностика иммунодефицитных состояний различного генеза;
оценка функциональной способности клеточного и гуморального иммунитета, в том числе после иммуносупрессии.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Форма представления результата

Тест количественный.

Референсные значения

KREC:

0-1 год — более 250 копий/10⁵ клеток

1-6 — более 100 копий/10⁵ клеток

6-18 — более 40 копий/10⁵ клеток

18-60 — более 12 копий/10⁵ клеток

60 и более – более 5 копий/10⁵ клеток

TREC:

0-1 год — более 200 копий/10⁵ клеток

1-6 — более 80 копий/10⁵ клеток

6-18 — более 30 копий/10⁵ клеток

18-45 — более 11 копий/10⁵ клеток

45 — более 0,21 копий/10⁵ клеток

Трактовка результатов исследования TREC и KREC для диагностики иммунодефицитов

Значение уровней TREC и KREC в пределах возрастных значений с высокой долей вероятности исключает наличие у пациента тяжелого комбинированного иммунодефицита (ТКИН). Данный результат не исключает наличие у пациента других форм иммунодефицитов, однако снижает вероятность заболеваний, связанных с продукцией и созреванием T- и B-лимфоцитов.

Изолированное снижение уровня TREC ниже возрастных норм указывает на количественные или функциональные нарушения продукции и дифференцировки T-клеточного звена иммунитета. Необходимо углубленное исследование для установления этиологических причин патологии.

Изолированное снижение уровня KREC ниже возрастных норм указывает на количественные или функциональные нарушения продукции и дифференцировки B-клеточного (гуморального) звена иммунитета. Необходимо углубленное исследование для установления этиологических причин патологии.

Сочетанное снижение уровней TREC и KREC ниже возрастных значений свидетельствует о комбинированном поражении клеточного и гуморального звеньев иммунитета, с высокой вероятностью может быть поставлен диагноз тяжелого комбинированного иммунодефицита (ТКИН). Необходимо углубленное исследование для установления этиологических причин патологии.