Метод определения
ПЦР с детекцией в режиме реального времени.
Исследуемый материал
Мазок со слизистой носоглотки и/или ротоглотки
Определение РНК вируса гриппа в мазке эпителиальных клеток ротоглотки и носоглотки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени.
Грипп – острая респираторная вирусная инфекция, передаваемая воздушно-капельным путем.
Возбудители гриппа – РНК-содержащие вирусы, относящиеся к семейству Orthomyxoviridae, в котором выделяют три рода: Influenza A virus, Influenza B virus, Influenza C virus.
Вирусы гриппа А и В ежегодно вызывают эпидемии большей или меньшей интенсивности практически во всех странах мира. Вирусы гриппа А широко распространены в природе, их выделяют у большинства зверей и птиц, в связи с чем они имеют высокий пандемический потенциал, так как способны преодолевать межвидовый барьер. Основной причиной возникновения эпидемий и пандемий гриппа является высокая вариабельность вируса вследствие изменений в его геноме. Это касается фрагментов, кодирующих поверхностные антигены вирусов типов А и В и определяющих их специфичность.
Вирусы Influenza А и B поражают преимущественно верхние отделы дыхательных путей: нос, горло, трахею и реже бронхи. Однако симптомы общей интоксикации при гриппе доминируют над умеренными катаральными проявлениями. Обычно заболевание сопровождается резким повышением температуры, мышечными и головной болями, сильным недомоганием, сухим кашлем, болью в горле и слизистыми выделениями из носа. Для гриппа, обусловленного новым или значительно измененным вирусом (например, для гриппа птиц типа А(H5N1) и А(H7N9), реже А (H1N1) pdm 2009), характерно острейшее, молниеносное начало, развитие различных вариантов токсикоза (нейротоксикоза, инфекционно-токсического шока в сочетании с гемодинамическими расстройствами) и III степени ДВС-синдрома (гемокоагуляционного шока).
Диагностика инфекции осуществляется комплексно, на основании анамнестических данных о контакте с больными гриппом и характерной клинической картины. Подтверждение диагноза возможно с помощью лабораторных исследований, что целесообразно при наличии клинических проявлений гриппа, в эпидемический сезон роста заболеваемости острыми респираторными инфекциями, при тяжелом течении респираторных болезней.
В качестве базовых тестов могут быть использованы следующие лабораторные исследования: определение антигенов вируса гриппа в мазках слизистой носа и ротоглотки методом непрямой иммунофлуоресценции или иммунохроматографии; определение антител к антигенам вируса гриппа А/B в сыворотке крови методом ИФА. Результаты ИФА, как правило, оцениваются ретроспективно. Вследствие поздней диагностики они не влияют на коррекцию терапии, но применимы в научных целях и для эпидемиологического надзора и контроля за гриппом. Наиболее современным методом лабораторной диагностики гриппа является выявление РНК вируса методом ПЦР.
Максимального уровня специфичности и чувствительности достигают тесты на основе ПЦР-ОТ (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени, позволяющие обнаруживать в биологическом материале РНК возбудителя инфекции.
Аналитические показатели:
определяемый фрагмент – специфический участок нуклеиновой кислоты вирусов гриппа А (Influenza virus A) и гриппа В (Influenza virus B);
специфичность обнаружения – отсутствие неспецифических реакций в отношении других вирусных и бактериальных возбудителей ОРЗ.
Аналитическая чувствительность:
вирус гриппа А (Influenza virus A) – 1×103 копий/мл исходного образца.
вирус гриппа В (Influenza virus В) – 1×103 копий/мл исходного образца.
Аналитическая специфичность
Перекрестных реакций с вирусами (парагрипп 1, 2, 3 и 4 типов, аденовирусы, бокавирусы, метапневмовирусы, респираторно-синцитиальные вирусы, риновирусы и коронавирусы hCoV NL63, hCoV OC43, hCoV 229E, hCoV HKU1, SARS-CoV-2) и микроорганизмов (Chlamydophila pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus spp, Streptococcus spp, Prevotella spp, Leptotrichia spp, Corynebacterium spp, Neisseria spp)
не обнаружено.
Пациентам
