Метод определения
ПДАФ-анализ STR-локусов ДНК.
Исследуемый материал
Буккальный эпителий
По результатам выдается заключение эксперта. Проводится по официально утвержденной методике. Заключение можно предоставлять в суд и иные государственные органы.
Молекулярно-генетическое исследование, направленное на определение биологического родства: отцовства или материнства, проводится для разрешения спорных случаев биологического происхождения детей.
Исследование выполняется с целью исключения или, напротив, установления родственных связей между предполагаемыми родителями (отцом или матерью) и ребенком. Установление родства по характеристикам ДНК – одно из направлений более масштабной области исследований, связанной с решением задач по идентификации личности молекулярно-биологическими методами.
При установлении отцовства или материнства основной принцип проведения исследования – анализ большого числа независимо наследуемых высокополиморфных локусов. Основное правило, позволяющее утверждать, что ребенок происходит от конкретных родителей – это то, что в генотипе ребенка по любому из исследуемых локусов один из аллелей всегда совпадет с аллелем, полученным от отца, а другой – с аллелем, полученным от матери. Поэтому чем реже в популяции встречается аллель, тем меньше вероятность случайного совпадения аллелей между предполагаемым родителем и ребенком, у которого исследуется ДНК.
В связи с этим главное в методике генетического исследования биологического родства – поиск и анализ совпадающих аллелей у предполагаемых родителей и ребенка. Если в ДНК-профиле ребенка зарегистрировано несовпадение аллелей как минимум по трем локусам с аллелями предполагаемого отца (матери), то делается вывод об исключении отцовства (материнства). При неисключении отцовства (материнства) проводят вероятностные расчеты для оценки достоверности полученного положительного заключения. Несмотря на то, что вероятность случайного совпадения генетических признаков по одному локусу сравнительно высока, использование более 15 локусов позволяет достигать уровня достоверности 99,99% и выше.
Для установления отцовства (материнства) применяется типирование полиморфных STR-локусов ДНК в препаратах с использованием методики полимеразной цепной реакции. Аббревиатура STR расшифровывается как короткие тандемные повторы (от англ. Short Tandem Repeats). STR-локусы представляют собой участки ДНК, в которых присутствуют повторяющиеся последовательности длиной 2-5 нуклеотидов. Количество таких повторов в том или ином локусе у разных членов популяции может существенно отличаться. В связи с этим STR-локусы относятся к высокополиморфным локусам. Установление родства по STR-локусам позволяет снизить вероятность случайных совпадений, так как таких локусов много и они равномерно распределены по всем хромосомам. В ходе исследования из образцов, представленных каждым участником, выделяется дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) набором Cordis Sprint (Гордиз, Россия), анализируется при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием маркерной системы Global Filer™ PCR Amplification Кit (реакция проводится на амплификаторе GeneAmp PCR Thermal Cycler 2720, Applied Biosystems, США) с последующим электрофоретическим фракционированием продуктов полимеразной цепной реакции с использованием системы капиллярного электрофореза ABI PRISM 3500 (Applied Biosystems, США).
Для оценки специфичности реакции амплификации используются препараты контрольной ДНК (положительный контроль, К+) с известными генотипическими признаками и препарат, не содержащий ДНК (отрицательный контроль, К-).
Анализ данных проводится с помощью программного обеспечения Gene Mapper ID-X.
Сравнивая идентифицированные аллели ребенка и предполагаемых родителей, проводится либо подтверждение отцовства (материнства), либо исключение.
Пациентам
