Метод определения
Цитогенетический анализ
Исследуемый материал
Цельная кровь
Цитогенетический анализ клеток периферической крови в онкогематологии широко применяется для диагностики главным образом хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) и неходжкинских лимфом (НХЛ). Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ) отмечает, что именно хромосомные аномалии являются одними из самых надежных критериев классификации и диагностики лимфоидных опухолей. Некоторые типы лимфом ассоциируются с высокоспецифичными клональными генетическими аномалиями, имеющими диагностическое значение. Например, при ХЛЛ наиболее часто встречающимися хромосомными аномалиями являются трисомия хромосомы 12, del(11q), del(13q), del(17p), del(6q) и del(14q).
Основными генетическими методами, используемыми как на этапах диагностики, так и при контроле проводимой терапии больных НХЛ, являются стандартное цитогенетическое исследование клеток периферической крови и FISH анализ с локус-специфическими зондами на интерфазных ядрах. При этом только стандартное цитогенетическое исследование позволяет произвести анализ одновременно всего хромосомного набора клетки и выявить не только высокоспецифические аномалии кариотипа, но и комплексные множественные хромосомные аберрации, крайне неблагоприятно влияющие на течение заболевания.
Для исследования кариотипа у больных ХЛЛ и НХЛ отбирают пробу периферической крови в специальные вакуумные пробирки с антикоагулянтом. Цитогенетическое исследование проводится на митоген-стимулированных В или Т-лимфоцитах в зависимости от типа лимфомы. Периферическая кровь культивируется в термостате 72 часа при температуре 37С. Добавление колцемида за 24 часа до окончания культивирования обеспечивает получение необходимого количества качественных метафазных пластин. Исследование кариотипа проводят методом световой микроскопии. Для визуализации хромосом цитогенетические препараты окрашивают специальными красителями, а также проводят предобработку препаратов ферментом трипсином с целью выявления гетерогенных участков хромосом и дифференциации каждой пары хромосом кариотипа.
Для каждого случая проводится анализ 20-30 метафазных пластин при помощи системы видеоанализа и регистрации изображений. Если одни и те же структурные нарушения кариотипа или дополнительные хромосомы обнаруживаются в 2х или более клетках, а потери хромосом – в 3х, то устанавливают наличие патологического клона клеток.
Пациентам
