Сдать анализ на антинуклеарный фактор (АНФ, HEp-2, титры)

Описание

Метод определения Непрямая иммунофлюоресценция на клетках перевиваемой клеточной линии НЕр-2 с определением основных типов свечения ядра.

Исследуемый материал Сыворотка крови

A12.06.057.000.03 (Номенклатура МЗ РФ, Приказ №804н)

Синонимы: Анализ кров на антинуклеарные антитела; Антиядерные антитела; АНА нРИФ; Antinuclear Antibodies; ANA indirect immunofluorescence assay IFA, HEp-2 Substrate; ANA-HEp2; Fluorescent AntiNuclear Antibody detection; FANA.

Краткое описание исследования «Антинуклеарный фактор»

Термин «антинуклеарный фактор» - традиционное обозначение результатов исследования антинуклеарных антител (АНА), полученных при использовании метода непрямой реакции иммунофлуоресценции на клеточных и тканевых субстратах (в современной модификации – преимущественно на препаратах клеток HEp-2).

Антинуклеарные антитела – семейство аутоантител, направленных против внутриклеточных антигенов собственных клеток организма. Исторически антитела этой группы, направленные против ядер клеток, были впервые выявлены в сыворотке больных системной красной волчанкой (СКВ), поначалу из их точных мишеней были известны только двухспиральная ДНК и гистоны, поэтому они получили общее название «антинуклеарные антитела».

«Золотым стандартом» исследования антинуклеарных антител и рекомендуемым скрининговым тестом при подозрении на системные аутоиммунные ревматические заболевания является метод непрямой иммунофлуоресценции на препаратах HEp-2-клеток с указанием типа свечения и титров выявленных антител. Ядро и цитоплазма клеток НЕр-2 содержат все антигены, характерные для человеческой клетки, что позволяет выявлять в одном тесте основные виды антинуклеарных антител. Часть их имеет мишенью ДНК или связанные нуклеосомные белки, другие нацелены на РНК и рибонуклеопротеины, антигены ядерной оболочки или аппарата митотического веретена. Многие из рибонуклеопротеиновых мишеней могут находиться как в ядре клетки, так и в цитоплазме, а некоторые исключительно в цитоплазме, т. е. являются, по сути, не нуклеарными, а цитоплазматическими антигенами. Однако все эти антитела причисляют к антинуклеарным соответственно обозначению метода их исследования, при этом выявляемый данным методом спектр антител шире и объединяет антитела не только к ядерным, но и другим внутриклеточным аутоантигенам.

АНА - ценный лабораторный маркер различных аутоиммунных заболеваний. Хотя бы однократное обнаружение антинуклеарных антител методом непрямой флуоресценции на клетках HEp-2 (или эквивалентным тестом) у пациента является критерием включения при диагностике СКВ  системной красной волчанки, согласно EULAR/ACR 2019. Специфические антинуклеарные антитела включены в классификационные критерии ряда других аутоиммунных заболеваний. При положительном результате АНФ вероятная клиническая значимость выявленного типа свечения учитывается в комплексе с клинической картиной, что позволяет планировать дальнейшее тестирование для определения специфичности антинуклеарных антител.

При системной красной волчанке и других системных ревматических заболеваниях иммунный ответ направлен против нуклеопротеиновых антигенов, т. е. комплексов нуклеиновых кислот и белков. Такие эндогенные нуклеопротеиновые аутоантигены могут образовываться в ходе процесса апоптоза эпителиальных клеток (каскада генетически запрограммированных реакций, приводящих к удалению поврежденной или дефектной клетки) и напоминают чужеродные вирусные частицы. Ускорение процессов апоптоза под действием ультрафиолетового облучения, вирусных инфекций или лекарственных препаратов, происходящее одновременно с нарушенным или замедленным удалением продуктов апоптоза, запускает аутоиммунные ответы при СКВ. Нуклеопротеиновые антигены конденсируются в апоптотических тельцах, которые становятся мишенью для аутоантител. В настоящее время описано около двухсот разновидностей антител к нуклеопротеинам и рибонуклеиновым кислотам, которые получили название антинуклеарные антитела. При аутоиммунных заболеваниях аутоантитела к ядерным антигенам не обладают прямым цитотоксическим действием на клетки человека, однако иммунные комплексы способны запускать иммунологическое воспаление, особенно в сосудах микроциркуляторного русла, в том числе в почках, коже, центральной нервной системе, синовиальной оболочке суставов, плевре.

В силу многообразия антигенов антинуклеарных антител не все они могут быть очищены или синтезированы для использования в автоматизированных иммуноферментных тестах по выявлению антинуклеарных антител. В свою очередь легкорастворимые компоненты ядра клетки могут утрачиваться из ядер клеток при фиксации препарата для проведения исследований антинуклеарного фактора методом непрямой иммунофлуоресценции. Поэтому использование ИФА-методов (см. тесты № 825, № 125) в комплексе с выявлением антинуклеарного фактора на клетках линии НЕр-2 методом непрямой иммунофлуоресценции позволяет избежать ложноотрицательных результатов тестирования при скрининге системных ревматических заболеваниях.

С какой целью определяют Антинуклеарный фактор

Метод непрямой иммунофлуоресценции на клеточной линии НЕр-2 рекомендован в качестве «золотого стандарта» выявления антинуклеарных антител ведущими экспертами, включая европейские (EASI Group, 2010) и американские группы экспертов (ACR ANA Task Force, 2008).

При каких заболеваниях обнаруживают в крови Антинуклеарный фактор

Позитивность по антинуклеарному фактору на клеточной линии НЕр-2 отмечается при системной красной волчанке, системных ревматических и многих других аутоиммунных заболеваниях, что делает его универсальным скрининговым тестом в обследовании больных с подозрением на системную аутоиммунную патологию. Положительный результат АНФ отмечается более чем у 90% больных с диффузными болезнями соединительной ткани, такими как СКВ и кожные формы этого заболевания, склеродермия и ее разновидности, смешанное заболевание соединительной ткани, синдром Шёгрена. Выявление антинуклеарного фактора имеет большое значение в диагностике ювенильного ревматоидного артрита.

Данные аутоантитела могут быть обнаружены при многих других аутоиммунных (тиреоидит, диабет, аутоиммунные заболевания печени), инфекционных (вирусный гепатит), воспалительных и онкологических заболеваниях. Встречаемость антинуклеарного фактора достигает 1-3% у клинически здоровых людей и несколько возрастает у лиц старше 65 лет.

Литература

Подготовка

Правила подготовки к исследованию крови на Антинуклеарный фактор

Рекомендуется взятие крови не ранее, чем через 4 часа после последнего приема пищи.

Показания к назначению

В каких случаях проводят анализ крови на Антинуклеарный фактор:

Тест используют для диагностики и дифференциальной диагностики следующих состояний:

системная красная волчанка (СКВ);
подострая кожная волчанка и другие разновидности кожной волчанки;
смешанное заболевание соединительной ткани;
синдром Шёгрена и ассоциированные заболевания;
диффузная и локализованная склеродермия, CREST-синдром;
воспалительные миопатии (полимиозит и дерматомиозит);
ювенильный хронический артрит;
аутоиммунный гепатит;
первичный билиарный цирроз и склерозирующий холангит;
полинейропатии и миелит.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения: титр.

Референсные значения: < 1:160.

Иногда могут быть описаны два типа свечения, при котором один в низких титрах маскирует другой. При выявлении положительного результата АНФ необходимо постараться установить антигенные мишени антинуклеарных антител с помощью тестов выявления антител к двуспиральной ДНК (№ 126) и антител к нуклеосомам (№ 956), иммуноблота антинуклеарных антител (№ 827), иммуноблота антител при склеродермии (№ 826), иммуноблота антител при полимиозите (№ 939) и определения антител к кардиолипину (№№ 967, 968, 969, 997).

Тип свечения	Мишени антител (примеры)	Заболевания
Гомогенный	Хроматин (дсДНК, гистоны)	СКВ, склеродермия
Гранулярный (мелкогранулярный; крупногранулярный)	Нуклеопротеины (RNP, Sm, SS-A, SS-B)	СКВ, смешанное заболевание соединительной ткани, дискоидная и подострая кожная красная волчанка, ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит, синдром Шёгрена
Ядрышковый	Антигены ядрышка (фибриллярин)	Диффузная склеродермия
Центромерный	Центромера в хромосоме (CENP-B)	Склеродермия
Цитоплазматический	Антигены цитоплазмы (тРНК-синтетазы, рибосомы, органеллы)	Аутоиммунные заболевание печени, СКВ, полимиозит
Цитоплазматический (митохондриальный)	Антигены митохондрий (антигены пируват-декарбоксилазного комплекса)	Первичный билиарный цирроз

Трактовка результатов исследования на Антинуклеарный фактор

Результатом определения антинуклеарного фактора является титр, представляющий собой значение конечного разведения сыворотки, при котором сохраняется значимая флюоресценция ядра. Чем выше знаменатель дроби, тем больше разведение сыворотки, тем больше антител в сыворотке больного. Высокие титры разведения сыворотки отражают высокую аффинность и концентрацию аутоантител.

Выявление высоких тиров (1/640 и выше) указывает на высокую вероятность системного ревматического заболевания или аутоиммунного заболевания печени и требует внимательного клинического, лабораторного и инструментального обследования. Отсутствие повышенных титров антинуклеарного фактора значительно снижает вероятность системных аутоиммунных заболеваний.

В низких титрах (до 1/160) антинуклеарный фактор может отмечаться у 1-2% здоровых лиц и родственников больных с системными заболеваниями. Частота положительных титров в популяции несколько увеличивается с возрастом. Низкие титры антинуклеарных антител могут встречаться при многих аутоиммунных, инфекционных и онкологических заболеваниях. Отсутствие высоких титров антинуклеарных антител значительно снижает вероятность системного ревматического процесса и может использоваться скорее для исключения, чем подтверждения диагноза.

Повышение титра АНФ в динамике указывает на обострение системного заболевания, так при СКВ титр коррелирует с тяжестью процесса и снижается при эффективной терапии.

Кроме титра сыворотки, при положительном результате анализа описывается тип свечения ядра. Описано более двадцати типов свечения, однако в клинической практике используются восемь из них (см. таблицу).